Стабильность и скорость подачи растворителя. В высокоэффективной эксклюзион-ной хроматографии погрешность определения молекулярных масс примерно на порядок выше, чем погрешность подачи растворителя i[37, 38]. В современных насосах с электронным управлением при ежедневной установке расхода далеко не всегда удается получить одну и ту же скорость подвижной фазы; при обычно используемой скорости потока 1 мл/мин погрешность установки в 0,01 мл/мин составляет один процент, что приведет к ошибке определения молекулярных масс около 10%. Это обстоятельство вызывает необходимость в тщательном ежедневном контроле скорости растворителя. Точность установки расхода проверяют специальными расходомерами или по времени выхода выбранного стандартного вещества.
Практически полностью устранить ошибки, связанные с воспроизводимостью установки расхода, позволяет метод внутреннего стандарта. В этом методе к анализируемым пробам добавляют некоторое количество индивидуального соединения, которое элю-ируется из колонки после выхода полимера и не накладывается на пики низкомолекулярных примесей [39, 40]. При изменении скорости потока отношение параметров удерживания полимера и стандарта остается постоянным.
Время удерживания полимерных фракций определяют по формуле
tR = tR' (WW),
где tR, ts — время удерживания фракции полимера и стандартного соединения по калибровке; t'R и t's — те же параметры, измеренные по хроматограмме.
В работе [39] в качестве очень удобного стандартного вещества предложено применять элементную серу, которая растворяется во многих растворителях и хорошо детектируется УФ-детектором и рефрактометром.
В хроматографических процессах, согласно уравнению Ван-Деемтера, существует оптимальная скорость потока, при которой колонка имеет наиболее высокую эффективность. Для большинства эксклюзионных колонок с размером частиц Юмкм она составляет около 1 мл/мин. При повышении скорости потока ВЭТТ возрастает, главным образом, за счет удшения масообмена. В эксклюзионной хроматографии этот процесс выражен наиболее резко, так как коэффициенты диффузии сильно снижаются при повышении молекулярной массы. Отсюда также следует, что снижение эффективности в наибольшей степени наблюдается для высокомолекулярных фракций.
Так, для полистирольного стандарта с Af=39-104 эффективность набора колонок с жесткими гелями при увеличении расхода от 1 до 2 мл/мин снижается примерно в полтора раза, а для толуола — практически не меняется.
