целесообразно рассмотреть на примере исследования образца, о котором не известно ничего, кроме растворимости (в воде или в органическом растворителе) [20]. Предварительное разделение образца проводят на бимодальном наборе колонок с широким диапазоном разделения. В зависимости от вида
получаемой хроматограммы изменяют разделительную систему в соответствии с рекомендациями, приведенными ниже.
1. Набор оптимален.
2. Недостаточный диапазон разделения: имеются высокомолекулярные фракции, попадающие в область эксклюзии. Необходимо добавить колонку с более крупными порами.
3. Имеются фракции, попадающие в область эксклюзии; колонка II не участвует в разделении. Необходимо заменить ее на колонку с более крупными порами, чем у колонки I.
4. Колонка II не участвует в разделении. Следует использовать две колонки типа I.
5. Улучшение разделения можно получить на двух колонках со средним размером пор.
6. Недостаточная селективность разделения; колонка I не участвует в разделении. Следует использовать две колонки типа II.
Если в любом из рассмотренных вариантов необходимо повысить эффективность разделения, то следует удвоить число колонок, входящих в выбранный набор.
Описанный процесс оптимизации не учитывает особенностей, связанных с адсорбцией анализируемых веществ и другими побочными явлениями. Устранение адсорбции за счет модификации подвижной фазы рассмотрено ниже.
Для предотвращения специфических затруднений, возникающих при эксклюзионной хроматографии биололимеров, витаминов и различных лабильных соединений, в последнее время чаще всего используют сорбенты с привитой карбогидратной (типа диол) или эфирной фазой ((i-бондагель Е) и полимерные сорбенты, предназначенные для работы в водных средах.
