От обычной обращенно-фазной хроматографии легко перейти к ион-парной на обращенной фазе, и наоборот.
Ион-парное разделение на обращенной фазе может быть проведено несколькими методами:
1) на привитой к матрице неподвижной фазе, состоящей из углеводородов;
2) то же самое, но в качестве противоиона используют ПАВ;
3) на неподвижной фазе, состоящей из механически удерживаемой органической жидкости;
4) на неподвижной фазе, содержащей жидкий ионообменник.
Важным условием проведения ион-парной хроматографии является стабильность системы. Это означает в случае механически удерживаемой жидкости несмешиваемость водной и органической фаз, что достигается четким термо-статированием и предварительным насыщением подвижной фазы неподвижной. При работе с нормальной фазой при введении противоиона в неподвижную фазу необходимо предотвратить его унос неподвижной фазой за счет образования ионных пар, покидающих болонку. Противоион в этом случае добавляют в образец до введения его в хроматограф или в подвижную фазу. Поскольку в ион-парной хроматографии работают с полярными веществами, склонными к образованию хвостов, следует помнить, что в этом случае желательно применить другую подвижную или неподвижную фазу, другой противоион. Необходимо, чтобы в ион-парной хроматографии при изменении концен-трации не изменялось значение к' образца, что может повлечь образование хвостов. Водная фаза должна иметь постоянную концентрацию лротивоиона и рН. Обычно используют цитратный или фосфатовый буферный раствор. Иногда противоион сам является буфером. В случае разделения при низких рН растворы сильных кислот обеспечивают достаточное буферное действие.
Интересно проследить роль противоиона в ион-парной обращенно-фазной хроматографии. Можно написать следующие уравнения для образца, имеющего анион и катион:
k'=(Vs/Vm)E(c+), k'={Vs/Vm)E(c),
где Е—константа экстракции конкретной ион-парной системы; (с+) и (с-) — концентрации анионного и катионного противоиона.
При прочих неизменных условиях Е постоянна и, следовательно, повышение концентрации противоиона в подвижной фазе приводит к увеличению к' при разделении на обращенной фазе. В нормально-фазной ион-парной хроматографии к' также меняется за счет изменения концентрации противоиона в подвижной фазе. Значение к' может регулироваться типом противоиона, например, замена гептансульфокислоты пентансуль-фокислотой может изменить к' в 2—5 раз. Этот эффект ярко выражен при низких концентрациях противоиона. Крупные молекулы противоиона дают большие величины к' при ион-парном разделении на обычной фазе. Так, переход от тетра-этиламмония к тетрапентиламмонию позволил изменить к' на несколько порядков.
