Иногда удается провести разделение на обращенной фазе таким образом, что основные компоненты образца элюируются со временем, близким к to, а микропримеси удерживаются на колонке, что облегчает их количественное определение. Оценка содержания микропримеси наиболее надежна, когда ее пик регистрируется до пика преобладающего в образце компонента. Элюирование пика микропримеси на хвосте преобладающего компонента сильно ухудшает ее количественное определение. Любое хроматографическое разделение на колонке приводит к разбавлению образца. При анализе микропримесей возникает проблема разделения при минимальном разбавлении. Степень разбавления введенного образца может быть выражена уравнением
С макс/Со = VsN°'5/[Vr(27i)0'5],
где Смакс — Концентрация, соответствующая максимуму пика; Со — исходная концентрация в образце; Vs — вводимый объем; N — число теоретических тарелок для данной колонки; Vr — удерживаемый объем микропримеси.
Из уравнения видно, что снижения степени разбавления, .а значит, увеличения чувствительности определения микропримеси можно достигнуть за счет увеличения вводимого объема, использования колонки с большим числом теоретических тарелок или за счет снижения объема удерживания микропримеси. К увеличению N ведет применение эффективных колонок, заполненных частицами с размером менее 10 мкм. При анализе микропримесей желательно применение коротких колонок (5—10 см) с размером частиц 3—5 мкм.
Большое влияние при анализе микропримесей оказывает изменение селективности системы и повышение коэффициента разделения а, что достигается изменением состава подвижной фазы и выбором оптимального хроматографического режима. Кроме того, как видно из уравнения
Смакс/Со =(0С—1 )/0С
изменение селективности может значительно снизить степень разбавления пика.
